制备FFPE切片
固定样本:
1.样品剖分后,立即放入 10% NBF,在室温 (RT) 下固定组织 16-32 小时。根据组织类型和大小,固定时间有所不同。固定时间少于 16 小时或长于 32 小时将影响 RNAscope® 分析的结果。
样本的脱水、包埋和切片:
1. 用 1X PBS 清洗样品。
2. 使用乙醇进行逐级脱水,然后使用二甲苯对样品进行透明。
3. 采用标准流程将样品包埋在石蜡中。
注:包埋的样品在15-20℃下干燥保存,若保存时间超过 1年,为确保RNA的质量,建议在 2-8℃下保存。
4. 根据需要修剪石蜡块,用切片机将包埋的组织切成5 +/- 1 µm的切片。将石蜡切片放入40-45℃的水浴,将切片贴附到 SUPERFROST® PLUS 载玻片上。
5. 在室温下过夜风干载玻片。
停止点可选。 请使用3 个月以内制备的组织切片。请在室温下使用干燥剂储存切片。
制备用于 RNAscope®2.5 分析的 FFPE 玻片
烤片
1. 在干燥箱中于 60℃下烤片1小时。停止点可选。烤片完成后立即使用,或在室温下使用干燥剂储存,储存时间不超过1周。储存过久可能会导致样品RNA降解。
2. 如果烤片完成后继续脱蜡约20分钟。
注:如果您选择画疏水圈停止点,可在第二天准备用于样品预处理和 RNAscope® 2.5分析的材料。