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工作流程图
样本前处理

 

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制备FFPE切片

固定样本：

1.样品剖分后，立即放入 10% NBF，在室温 (RT) 下固定组织 16-32 小时。根据组织类型和大小，固定时间有所不同。固定时间少于 16 小时或长于 32 小时将影响 RNAscope® 分析的结果。

样本的脱水、包埋和切片：

1. 用 1X PBS 清洗样品。

2. 使用乙醇进行逐级脱水，然后使用二甲苯对样品进行透明。

3. 采用标准流程将样品包埋在石蜡中。

注：包埋的样品在15-20℃下干燥保存，若保存时间超过 1年，为确保RNA的质量，建议在 2-8℃下保存。

4. 根据需要修剪石蜡块，用切片机将包埋的组织切成5 +/- 1 µm的切片。将石蜡切片放入40-45℃的水浴，将切片贴附到 SUPERFROST® PLUS 载玻片上。

5. 在室温下过夜风干载玻片。

停止点可选。 请使用3 个月以内制备的组织切片。请在室温下使用干燥剂储存切片。

 

制备用于 RNAscope®2.5 分析的 FFPE 玻片

烤片

1. 在干燥箱中于 60℃下烤片1小时。停止点可选。烤片完成后立即使用，或在室温下使用干燥剂储存，储存时间不超过1周。储存过久可能会导致样品RNA降解。

2. 如果烤片完成后继续脱蜡约20分钟。

注：如果您选择画疏水圈停止点，可在第二天准备用于样品预处理和 RNAscope® 2.5分析的材料。

 

 

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